Iain Glen 1961. június 24-én született Edinburgh-ban, Skóciában. A színészmesterséget a londoni Royal Academy of Dramatic Art-on szerezte, ahol Bancroft aranymedállal tüntették ki. Színházi szerepei között olyan darabok szerepelnek, mint a Hamlet (a főszerep megformálásáért Ian Charleson-díjat kapott 1991-ben), a Macbeth (1993), a V. Henrik (1995), a Sirály, A vágy villamosa (2002), a Lear király és a Kísértetek (rendezőként is jegyzi). Filmes pályája sorozatszerepekkel indult - játszott a Taggart, a Screen Two és a The Fear (1988) című sorozatokban. A hold hegyei (1990) című kalandfilmben John Hanning Speke szerepét kapta meg, majd a Rosencrantz és Guildenstern halott című filmdrámában Gary Oldman, Tim Roth, Joanna Roth és Richard Dreyfuss oldalán volt látható. Ezt követően szerepet kapott az Egy lövés a fejbe, öt a testbe (1993) című filmdrámában, ahol Harvey Keitel, míg a Hölgy a képen című alkotásban Helen Mirren volt partnere. Ezt követte a Mararía (1998) spanyol és a Gyönyörű teremtmény (2000) amerikai filmdrámák 1-1 szerepe.

Angelina Jolieval játszott együtt a Lara Croft: Tomb Raiderben (2001), míg a Darkness - A rettegés háza (2002) háborús filmdrámában Dr. Jungként főszerephez jutott. Dr. Isaacs figuráját formálta meg a Kaptár 2. - Apokalipszis (2004) és A kaptár 3. - Teljes pusztulás (2007) című akciófilmekben. A Lélektől lélekig (2005) című drámában Joseph Fiennes és Kristin Scott Thomas mellett szerepelt. Otto Frank bőrébe bújt a (2009) életrajzi ihletésű alkotásban, majd ugyanezen évben IV. György királyt keltette életre a Churchill háborúja (2009) című történelmi filmben.

Szerepelt a Johanna nőpápa (2009) és a Harry Brown (2009) című alkotásokban is. Alfred Roberts szerepét nyerte el Meryl Streep oldalán A Vaslady-ben (2011). Sorozatokban is vállal szerepet: Haven (2010), Downton Abbey (2010), Trónok harca (2011), Ripper Street (2012), Válaszcsapás (2015). Jelenleg a Dusty and Me (2015), az Az élet ára (2015) és a What About Love (2015) című alkotásokon dolgozik.