John Cho Szöulban született 1972. június 16-án Cho Yo-han néven. Apja lelkész volt. Cho 1990-ben érettségizett a Herbert Hoover High School-ban. Ezután az University of California-ra ment, ahol 1996-ban diplomázott és angol tanár lett a West Hoolwood-i Pacific Hills School-ban. 2006-ban feleségül vette Kerri Higuchi-t, akitől két gyermeke született. Fia 2008-ban, míg lánya 2013-ban jött világra. 2012-ben támogatta Barack Obama választási kampányát. Egy Larry King interjúban egyértelműsítette, hogy bár egy filmbeli karaktere nem veti meg a marihuánát, a valóságban nem él vele.

Filmes karrierjét 1997-ben kezdte a Boston Common egy részében. A következő években olyan alkotásokban működött közre, mint az Amikor a farok csóválja…, a Yellow, az Amerikai pite, a Fergeteges forgatás, az Amerikai szépség, a Finstones 2, a Mennyé má!, az Evolúció, az Amerikai pite 2 és az Embertelen pók. 2001-ben rá osztották Chau Presley szerepét az Off Centre 28 epizódjában. 2003-ban ismét John bőrébe bújt az Amerikai pite – Az esküvő című vígjátékban. 2004-ben Harold Lee-t formálta meg a Kalandférgekben, majd később ugyanígy tett a második részben és a Kalandférgek karácsonyában. 2009-ben Demetri Noh bőrébe bújt a FlashForward – A jövő emlékei 21 részében. Ugyanebben az évben megkapta Sulu szerepét a Star Trek-ben, majd visszatért karakteréhez a Sötétségben – Star Trek és a Star Trek: Mindenen túlban. 2012-ben 22 részen át játszotta Steven-t a Csoportban marad-ban. 2013-ban a Személyiségtolvajban ő volt Daniel Casey. Legutóbb a The Hindenburg Explodes!-ben tűnt fel 2016-ban.